myPOLS Biotec正在開發(fā)新一代的DNA聚合酶
用于和可靠的應用，例如個性化醫(yī)療，病原體檢測，DNA和RNA診斷，法醫(yī)學等等。
我們的研發(fā)活動包括：
后但并非不重要：我們所有的酶和混合物都是在康斯坦茨內(nèi)部生產(chǎn)的，并經(jīng)過常規(guī)測試，符合高質量標準。
myPOLS Biotec是一家來自康斯坦茨大學的生物技術公司，來自Andreas Marx教授的研究小組。憑借我們在高通量DNA聚合酶設計方面的專業(yè)知識，我們?yōu)槟膽枚ㄖ泼浮?/span>
是原始Volcano DNA聚合酶的下一代，具有進一步改善的逆轉錄活性。該酶是一種工程化的，極其熱穩(wěn)定的逆轉錄酶和組合的DNA聚合酶，通過定向的人工進化獲得。
Volcano2G DNA聚合酶直接從RNA模板促進“零步驟”RT-PCR（沒有等溫逆轉錄步驟），因為在循環(huán)PCR延伸步驟期間逆轉錄與DNA擴增同時發(fā)生。這也允許在高溫下進行逆轉錄反應，從而小化在高溫下熔化的RNA中的強二級結構遇到的問題。
文章 | 產(chǎn)品 | 尺寸 |
＃8100S | Volcano2G DNA聚合酶 | 250 U，5U /μl，50μl |
＃8100M | Volcano2G DNA聚合酶 | 1000U，5U /μl，200μl |
更簡單，更快捷：0步RT-PCR協(xié)議：
跳過逆轉錄步驟。不需要等溫反轉錄步驟。
Volcano2G是一種PCR活性逆轉錄酶，具有*的熱穩(wěn)定性，在95°C的半衰期> 40 min。
當添加實時PCR染料時，Volcano2G DNA聚合酶也可用于實時PCR。Volcano2G具有Taq DNA聚合酶樣核酸酶結構域，因此也適用于基于水解探針的分析。如此處所示，通過使用基于探針的qPCR測定和零步驟RT-PCR方案，使用10倍稀釋系列的總RNA檢測NONO mRNA：
Volcano2G 5x反應緩沖液針對擴增子大小在60-300bp之間進行了優(yōu)化。
當添加合適的實時PCR染料或熒光探針時，Volcano2G逆轉錄酶也可用于實時PCR。
這種*的酶能夠進行基于PCR的RNA檢測，無需單獨的逆轉錄步驟。
Volcano2G逆轉錄酶可以可靠地檢測≥1ng總RNA輸入的RNA靶標。
Volcano2G DNA聚合酶不需要Mn 2+ 以獲得宜活性。然而，通過向反應中添加Mn 2+可以進一步優(yōu)化一些測定（建議的范圍是0.5-1mM，未提供Mn 2+）。
RT-PCR活性：測試Volcano2G DNA聚合酶活性的成功RT-PCR性能。在PCR循環(huán)儀中從人總RNA提取物擴增151bp片段（HPRT1 mRNA），并將其顯示為單一擴增產(chǎn)物。
DNA聚合酶活性：已經(jīng)使用人工DNA模板和DNA引物監(jiān)測Volcano2G聚合酶活性并將其調(diào)整為特定的DNA聚合酶活性。
通過蛋白質特異性染色確定酶濃度。有關批次特定濃度，請通過info@mypols.de查詢更多信息。
本產(chǎn)品采用冷藏包裝。請在抵達-20°C時存放產(chǎn)品。
應用
反應設置
零件 | 卷 | 終濃度 |
引物前移（10μM） | 1μl | 500 nM（50-1000 nM） |
引物反向（10μM） | 1μl | 500 nM（50-1000 nM） |
dNTPs（10 mM） | 2μl | 400μM |
5 x Volcano緩沖區(qū) | 10μl | 1X |
Volcano2G DNA聚合酶5 U /μl | 1μl | 5-10 U /反應 |
模板/樣品提取物* | 各種μl | >（1-1000） |
不含核酸酶的水 | 總反應體積高達50μl |
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將所有組件保存在冰上。
在使用前仔細旋轉并混合所有溶液。
*推薦的終模板濃度在5-50 ng /μl之間。
典型的0步RT-PCR方案（不需要等溫逆轉錄步驟）
步 | 溫度 | 時間 |
初始變性 | 95℃ | 2分鐘 |
變性 | 95℃ | 15秒 |
退火/延伸* | 各種* | 45秒（25-40周期） |
可選的熔化步驟 |
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可以使用兩步法和三步法PCR方案。
*通過運行溫度梯度來理想地建立新的PCR，以便找到每個引物對的宜退火/延伸溫度。引物的退火溫度受其核酸序列和反應緩沖液組成（鹽和pH）的強烈影響。Volcano2G DNA聚合酶在50-95°C之間活躍。
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