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Worthington組織消化指南
引言
組織消化酶主要用于組織培養(yǎng)和細胞生物學研究的原代細胞的分離和收集。盡管這些消化酶已經普遍應用多年，但是對其組織消化和細胞收集的作用機制卻沒有全面的理解。 由此導致的結果便是選擇一種消化方法大多是隨機選擇或基于過去的經驗，而不是在*理解消化原理的基礎上選擇的消化方案，以及如何根據(jù)具體實驗目的修正消化方案以獲得更好的實驗結果。
細胞分離程序的目的是zui大程度的獲得功能活性的單個細胞，而影響結果的原因有很多，包括（不限于）以下：
1、組織類型
2、物種來源
3、動物年齡
4、遺傳改造情況（如knockouts）
5、所用的消化培養(yǎng)液
6、所用的酶
7、消化酶中的雜質
8、所用消化酶的工作濃度
9、溫度
10、孵育時間
通常前四個原因沒辦法選擇，而剩下的原因一般由經驗決定以獲取zui適實驗結果。
通過查閱文獻來選擇*組織消化酶和zui適消化條件的研究人員通常被互相矛盾的實驗數(shù)據(jù)搞得一頭霧水。這些巨大差異來源于組織胞外基質的復雜而動態(tài)的特性，以及過去常用的粗制、未提純的組織分離酶。另外，組織胞外基質由各種蛋白、糖蛋白、脂類和糖脂組成，這些成分的組成比例在不同物種、不同組織、甚至不同發(fā)育（年齡）之間存在明顯的差異，這些因素都極大的影響了消化方案的制定。目前通常使用的粗制酶，如鏈霉蛋白酶、NF1:250、以及含有幾種其他不同濃度蛋白酶的膠原酶、以及各種多糖酶、核酶和脂酶。
本指南總結了目前常用組織消化酶的zui適消化和細胞收集知識和方法，描述了標準的實驗步驟， 以便于制定一個*的細胞分離方案，同時列舉了一些相關的參考文獻。
下表列出多種組織的適宜消化酶（含參考文獻，以組織類型和物種分類，詳見鏈接）
脂肪組織 | 腎上腺組織 | 骨組織 | 腦組織 |
軟骨組織 | 結腸組織 | 內皮組織 | 上皮組織 |
眼 | 心臟 | 腸 | 腎 |
肝 | 肺 | 淋巴結 | 乳腺 |
其它組織 | 其他組織 | 肌組織 | 神經組織 |
胰腺 | 腮腺 | 垂體 | 前列腺 |
生殖 | 動物鱗片 | 皮膚 | 脾臟 |
干細胞 | 胸腺 | 甲狀腺/甲狀旁腺 | 扁桃體 |
腫瘤 |
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注：使用Worthington公司消化酶的文獻不限于上表鏈接中所列，一般而言，Worthington公司的組織消化酶可用于大多組織類型的消化。
垂體組織消化手冊
| 物種 | 詳細來源 | 細胞名稱 | 消化用酶 | 培養(yǎng)基 | 參考文獻 |
| 牛 | 牛犢, 雄性,不到6個月大 | Pituitary | Collagenase: 0.3% | DMEM | Hassan, H., and Merkel, R.: Perifusion Model System to Culture Bovine Hypothalamic Slices In Series with Dispersed Anterior Pituitary Cells, In Vitro Cell Dev Biol 30A, 435, 1994 |
| 牛 | 牛 | Pituitary | Collagenase: 0.1% | EBSS, CMF | Mason, W. and Ingram, C.: Techniques for Studying the Role of Electrical Activity in Control of Secretion by Normal Anterior Pituitary Cells, Vol. 124,, , 207, 1986 |
| 牛 | 牛 | Follicular, anterior pituitary and pars tuberalis | Deoxyribonuclease I: 200 礸/ml | HBSS, CMF | Ferrara, N., Goldsmith, P., Fujii, D., and Weiner, R.: Culture and Characterization of Follicular Cells of the Bovine Anterior Pituitary and Pars Tuberalis, Vol. 124,, , 245, 1986 |
| 牛 | 牛犢, 雄性, 1-6 周大 | Pitituary | Hyaluronidase: 0.1% | DMEM | Ridgway, E., Klibanski, A., Marorana, M., Milbury, P., Kieffer, J., and Chin, W.: The Effect of Somatostatin on the Release of Thyrotropin and its Subunits from Bovine Anterior Pitituary Cells in Vitro, Endocrinology 112 (6), 1937, 1983 |
| 小鼠 | 小鼠, 雄性 | Pituitary | Collagenase: 0.4% | DMEM/Han's F12 | Steveson Tami C, Ciccotosto Giuseppe D, Ma Xin-Ming, Mueller Gregory P, Mains Richard E, Eipper Betty A: Menkes protein contributes to the function of peptidylglycine alpha-amidating monooxygenase, Endocrinology 144, 188-200, 2003 |
| Hyaluronidase: 0.1% | |||||
| Trypsin: 0.3% | |||||
| 綿羊 | 綿羊, 成年的 | Somatotropes | Collagenase Type 1: 0.3% | Medium 199 | Xu Ruwei, Wang Qinling, Yan Ming, Hernandez Maria, Gong Changhong, Boon WahChin, Murata Yoko, Ueta Yoichi, Chen Chen: Orexin-A augments voltage-gated Ca2+ currents and synergistically increases growth hormone (GH) secretion with GH-releasing hormone in primary cultured ovine somatotropes, Endocrinology 143, 4609-19, 2002 |
| Hyaluronidase: | |||||
| 大鼠 | 大鼠, 雄性, 12-15 周 | Pituitary | Collagenase Type 2: 0.4% | DMEM | Akieda-Asai, S., Zaima, N., Ikegami, K., Kahyo, T, Yao, I., Hatanaka, T., Iemura, S., Sugiyama, R., Yokozeki, T., Eishi, Y., Koike, M., Ikeda, K., Chiba, T., Yamaza, H., Shimokawa, I., Song, S., Matsuno, A., Mizutani, A., Sawabe, M. Chao, N., Tanaka, M., : SIRT1 Regulates Thyroid-Stimulating Hormone Release by Enhancing PIP5K gamma Activity through Deacetylation of Specific Lysine Residues in Mammals., PLoS ONE 5, e11755, 2010 |
| Deoxyribonuclease I: 0.04% | |||||
| 大鼠 | Wistar大鼠, 雄性, 2個月大 | Pituitary | Trypsin: 0.1% | DMEM | Zhou, X., De Schepper, J., De Craemer, D., Delhase, M., Gys, G., Smitz, J., and Hooghe-Peters, E.: Pituitary Growth Hormone Release and Gene Expression in Cafeteria-Diet-Induced Obese Rats, J Endocrinol 159, 165, 1998 |
| 大鼠 | SD大鼠, 雌性, 200 - 250克 | Anterior pituitary gland | Trypsin: 0.1% | EBSS, CMF | D'Emden, M. and Wark, J.: Culture Requirements for Optimal Expression of 1,25-Dihydroxyvitamin D3-Enhanced Thyrotropin Secretion, In Vitro Cell Dev Biol 27, 197, 1991 |
| 大鼠 | 大鼠 | Pituitary | Trypsin: 0.3 % | HEPES | Wilfinger, W., Larsen, W., Downs, T., and Wilbur, D.: An In Vitro Model for Studies of Intercellular Communication in Cultured Rat Anterior Pituitary Cells, Tissue Cell 16 (4), 483, 1984 |
| 大鼠 | SD大鼠, 雄性, 250-450克 | Anterior pituitary | Trypsin: 0.25% | Krebs | Portanova, R., Smith, D., and Sayers, G.: A Trypsin for the Preparation of Isolated Rat Anterior Pituitary, Proc Soc Exp Biol Med 133, 573, 1970 |
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