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重組豬源RNase抑制劑說明書

 更新時(shí)間:2023-04-21 點(diǎn)擊量:647

重組豬源RNase抑制劑說明書

上海起發(fā)生物科技有限公司(Shanghai BioHub Biotechnology Co., Ltd.)屬于上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司(2009年成立)旗下的子公司,成立的初衷是建立上海起發(fā)生物自有品牌,打造優(yōu)質(zhì)的生物試劑民族自有品牌。降低成本的同時(shí),把好生物產(chǎn)業(yè)鏈中的國產(chǎn)生物試劑品質(zhì)關(guān)。未來讓每一個(gè)和我們一樣擁有民族情懷的企業(yè),共同創(chuàng)世界優(yōu)秀的中國生物制造企業(yè),圓夢(mèng)中國。

產(chǎn)品詳情

貨號(hào)

規(guī)格

價(jià)格

78BAB10003-100uL

100uL(4KU)

¥200.00

78BAB10003-1ml

1ml (40KU)

¥1600.00

78BAB10003-50ml

50ml (2MU)

¥50000.00

 產(chǎn)品描述

本產(chǎn)品是以大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá),并通過親和層析純化的重組豬源RNase抑制劑,該蛋白特征與豬肝和人胎盤來源此類酶相似,可替代天然提取 RNase Inhibitor的應(yīng)用。本產(chǎn)品與RNase A形成1: 1復(fù)合體,抑制RNase活性。該反應(yīng)是可逆的,通過尿素及巰基類試劑能夠解離復(fù)合體,使RNase復(fù)性而抑制劑不可逆失活。本產(chǎn)品與其它競(jìng)爭性抑制劑(核酸類,無機(jī)磷酸類)不同,可以很容易地通過苯酚處理將其從反應(yīng)體系中除去,但不能抑制逆轉(zhuǎn)錄酶的RNase H的活性。使用時(shí)可直接加入含有RNA的反應(yīng)液中用于cDNA第一鏈合成、體外轉(zhuǎn)錄和體外翻譯等實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品特點(diǎn)

·       cDNA合成

·       體外轉(zhuǎn)錄

·       體外翻譯

·       1-Step RT-qPCR

產(chǎn)品組分

緩沖液成分:20 mM HEPES-KOH(pH 7.6),50mM KCl,8mM DTT,50% (v/v) glycerol。 

 

使用方法

使用方法

溫馨提示:需要用無RNA酶的PCR管中配制RNA/引物預(yù)混液

1 cDNA合成

 (1)在無RNA酶的PCR管中配制RNA/引物預(yù)混液

組分

反應(yīng)體積(10ul)

Oligo(dT)20

(或Random primer)

(或基因特異引物)

25pmoles

(25pmoles)

(5pmoles)

10mM dNTPs

2µL

模板RNA

2pg-5µg

DNase/Rnase Free Water

10ul

 

(2)65℃加熱5min,立即置于冰上

組分

反應(yīng)體積(10ul)

RNA引物預(yù)混液

10ul

5x RT Buffer

4µL

BIOHUB Reverse Transcritase

1ul

RNase inhibitor(40U/µL)

1ul

100mM DTT

2ul

DNase/Rnase Free Water

補(bǔ)足20ul

 

(3)輕輕混勻,按如下反應(yīng)條件設(shè)置

逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件

1

42℃

20-60min

2

99℃

5min

 

備注:逆轉(zhuǎn)錄溫度可在42-60之間調(diào)整,反應(yīng)時(shí)間建議在20-60min內(nèi)調(diào)整

   

(4)得到的cDNA溶液可以直接用于第二鏈cDNA合成及后續(xù)PCR反應(yīng)。

優(yōu)化參考方法

優(yōu)化參數(shù)

參考范圍

逆轉(zhuǎn)錄

50-60℃ 5-15min

預(yù)變性溫度時(shí)間

95-98℃ 10sec-5min

變性溫度

95-98℃ 3sec-10sec

延伸/退火溫度

60-65℃ 5sec-30sec

 

注意事項(xiàng)

1. 本產(chǎn)品在PH7?8時(shí)表現(xiàn)最佳抑制RNase活性。

2. 本產(chǎn)品發(fā)揮活性作用至少添加1 mM的DTT。

3. 本產(chǎn)品不抑制RNase H活性及逆轉(zhuǎn)錄酶活性。

運(yùn)輸及保存方法

 

-20℃可保存12個(gè)月。


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